PCR擴(kuo)增(zeng)后出現(xian)(xian)的條帶與(yu)預計的大(da)小不(bu)一(yi)致，或大(da)或小，或者同時出現(xian)(xian)特(te)異(yi)性擴(kuo)增(zeng)帶 與(yu)非(fei)特(te)異(yi)性擴(kuo)增(zeng)帶。非(fei)特(te)異(yi)性條帶的出現(xian)(xian)，其(qi)原因(yin)：
1、引物與靶序(xu)列(lie)不wan全互補、或引物聚合形成二(er)聚體(ti)。
2、Mg2+離子濃(nong)度過(guo)高、退火(huo)溫度過(guo)低，及PCR循環(huan)次(ci)數(shu)過(guo)多(duo)有關。其次(ci)，是(shi)酶(mei)(mei)的質和量，往往一(yi)些來源(yuan)的酶(mei)(mei)易出現(xian)非(fei)特異條(tiao)帶而另一(yi)來源(yuan)的酶(mei)(mei)則不出現(xian)，酶(mei)(mei)的量過(guo)多(duo)有時也(ye)會出現(xian)非(fei)特異性擴增。
其對策有：
①必要時，重新(xin)設計引物。
②減低酶(mei)的(de)量或(huo)調(diao)換另一來源的(de)酶(mei)。
③降低引物量，適當增加模(mo)板量，減少(shao)循環(huan)次數。
④適當提高(gao)退火(huo)溫度或采用二溫度點法(fa)(93℃變性(xing)，65℃左右退火(huo)與延(yan)伸，也叫兩步法(fa))。
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