ELISA的比色測定(ding)(ding)由酶標儀(yi)進行(xing)，有(you)的同行(xing)可(ke)能會認為(wei)(wei)(wei)，既然由酶標儀(yi)進行(xing)，那么此時便可(ke)以(yi)萬事大(da)吉了，其實不然，因為(wei)(wei)(wei)當代較(jiao)為(wei)(wei)(wei)先進的酶標儀(yi)器(qi)儀(yi)表，均有(you)較(jiao)多的功能，使用不當，會得到令(ling)人難以(yi)理(li)(li)解(jie)的結果(guo)。如使用酶標儀(yi)比色測定(ding)(ding)后(hou)，有(you)許(xu)多陰性測定(ding)(ding)孔的吸光度(du)值為(wei)(wei)(wei)負數或測定(ding)(ding)假陽性率(lv)大(da)大(da)增加(jia)等等。這主要是沒(mei)有(you)正確(que)地(di)理(li)(li)解(jie)和使用酶標儀(yi)所致。至于如何正確(que)理(li)(li)解(jie)和使用酶標儀(yi)詳見后(hou)面(mian)有(you)關(guan)(guan)章節。此處，重點(dian)關(guan)(guan)注點(dian)下(xia)面(mian)兩點(dian)：
1、比色測定時，一定要注意(yi)酶標儀的波長是否已調至(zhi)合適或所用濾光片是否正確(que)。由于有(you)的臨床實驗室在(zai)進行ELISA測定時，以TMB為底物和以(yi)OPD為底(di)物的試劑(ji)盒均有(you)使用，而前者比色波長為450nm，后者(zhe)為492nm，濾光片(pian)需(xu)根據(ju)要求(qiu)隨時更換(huan)。因此，容易(yi)出現(xian)濾光片(pian)錯用(yong)的問題。
2、單(dan)波長(chang)(chang)或(huo)雙波長(chang)(chang)比(bi)色(se)選擇的(de)(de)問(wen)題(ti)。中檔以(yi)上(shang)的(de)(de)酶(mei)標儀基本(ben)上(shang)都同時具有單(dan)波長(chang)(chang)和(he)雙波長(chang)(chang)比(bi)色(se)功能。所(suo)謂的(de)(de)單(dan)波長(chang)(chang)比(bi)色(se)即是通常的(de)(de)以(yi)對顯色(se)具有最大吸收的(de)(de)波長(chang)(chang)如450nm或(huo)492nm進行比色測定；而雙(shuang)波長雙(shuang)色則酶標(biao)儀在敏感(gan)波長如450nm和(he)非敏感波長如630nm下(xia)(xia)各測(ce)(ce)(ce)(ce)定一次，敏感波(bo)上下(xia)(xia)的(de)(de)(de)吸(xi)光(guang)度(du)測(ce)(ce)(ce)(ce)定值(zhi)(zhi)為樣本(ben)測(ce)(ce)(ce)(ce)定酶(mei)反應(ying)特異(yi)顯色的(de)(de)(de)吸(xi)光(guang)度(du)與(yu)(yu)板孔(kong)(kong)上指(zhi)紋(wen)、刮(gua)痕、灰塵(chen)(chen)等臟物所(suo)致(zhi)的(de)(de)(de)吸(xi)光(guang)度(du)之(zhi)和；非(fei)敏感波(bo)長(chang)(chang)下(xia)(xia)測(ce)(ce)(ce)(ce)定即改(gai)變波(bo)長(chang)(chang)至一定值(zhi)(zhi)，使得(de)樣本(ben)測(ce)(ce)(ce)(ce)定酶(mei)反應(ying)特異(yi)顯色的(de)(de)(de)吸(xi)光(guang)度(du)值(zhi)(zhi)為零，此(ci)時(shi)測(ce)(ce)(ce)(ce)得(de)的(de)(de)(de)吸(xi)光(guang)度(du)即為臟物的(de)(de)(de)吸(xi)光(guang)度(du)值(zhi)(zhi)。最后酶(mei)標儀給出的(de)(de)(de)數值(zhi)(zhi)為敏感波(bo)長(chang)(chang)下(xia)(xia)的(de)(de)(de)吸(xi)光(guang)度(du)值(zhi)(zhi)與(yu)(yu)非(fei)常(chang)感波(bo)長(chang)(chang)下(xia)(xia)的(de)(de)(de)吸(xi)光(guang)度(du)值(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)差。因此(ci)，雙(shuang)波(bo)長(chang)(chang)比色測(ce)(ce)(ce)(ce)定具有能排除由微滴(di)板本(ben)身(shen)、板孔(kong)(kong)內標本(ben)的(de)(de)(de)非(fei)特異(yi)吸(xi)收、指(zhi)紋(wen)、刮(gua)痕、灰塵(chen)(chen)等對特異(yi)顯色測(ce)(ce)(ce)(ce)定吸(xi)光(guang)度(du)的(de)(de)(de)影響的(de)(de)(de)優(you)點，一般不必設(she)(she)空(kong)白孔(kong)(kong)。如在使用(yong)雙(shuang)波(bo)長(chang)(chang)比色時(shi)，仍(reng)設(she)(she)空(kong)白孔(kong)(kong)，就(jiu)可能會造成前面(mian)提到的(de)(de)(de)測(ce)(ce)(ce)(ce)定孔(kong)(kong)吸(xi)光(guang)度(du)為負數的(de)(de)(de)現(xian)象。由于(yu)ELISA測定中單(dan)個空(kong)白(bai)孔的(de)非特異吸收上(shang)有一定程度的(de)不確定性，也就是說(shuo)每(mei)次測定或同次測定空(kong)白(bai)孔位置的(de)不同均有可能得(de)到不同吸光度測定值，故而(er)在ELISA測定比色(se)時，最好(hao)是(shi)使(shi)用雙波長比色(se)。
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