小鼠檢測試劑(ji)盒試驗原理:
小鼠檢測試劑盒是(shi)固相(xiang)夾(jia)心法酶(mei)聯(lian)免疫吸(xi)附實(shi)驗(ELISA).已(yi)知(zhi)ALT濃(nong)度(du)的標準品(pin)(pin)、未知(zhi)濃(nong)度(du)的樣品(pin)(pin)加入微孔(kong)酶(mei)標板內進行(xing)檢測。先將ALT和標記的抗(kang)體(ti)同(tong)時溫育。洗滌后(hou),加入親和素標記過的HRP。再(zai)經(jing)過溫育和洗滌,去除未結(jie)合的酶(mei)結(jie)合物(wu),然后(hou)加入底物(wu)A、B,和酶(mei)結(jie)合物(wu)同(tong)時作用。產生顏色(se)。顏色(se)的深淺(qian)和樣品(pin)(pin)中ALT的濃(nong)度(du)呈比例(li)關系。
小鼠檢測試劑盒注意事項:
1.小鼠檢(jian)測試劑(ji)盒從冷藏環(huan)境中(zhong)取出應(ying)在室溫(wen)平(ping)衡 15-30 分鐘(zhong)后方可使(shi)用,酶標(biao)包(bao)被(bei)板(ban)開封后如未用完,板(ban)條應(ying)裝入密封袋中(zhong)保存(cun)。
2.濃(nong)洗滌液(ye)可能會有結(jie)晶析出,稀釋時可在(zai)水浴中加溫助(zhu)溶,洗滌時不影響結(jie)果。
3.各步加樣(yang)均應使(shi)用加樣(yang)器(qi),并經常校對其準確性,以避(bi)免試驗誤差。一次加樣(yang)時間控制(zhi)在 5 分(fen)鐘內,如標本數量(liang)多(duo),使(shi)用排(pai)槍加樣(yang)。
4.請(qing)(qing)每次測定(ding)的同時做標(biao)準曲(qu)線,做復(fu)孔(kong)。如標(biao)本(ben)(ben)中待測物質含量過高(樣本(ben)(ben)OD 值大于標(biao)準品(pin)孔(kong)*孔(kong)的OD 值),請(qing)(qing)先用樣品(pin)稀釋(shi)液稀釋(shi)一(yi)定(ding)倍(bei)數(shu)(n 倍(bei))后再測定(ding),計(ji)算時請(qing)(qing)乘以總稀釋(shi)倍(bei)數(shu)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免(mian)交叉污染。
6.底(di)物請避光(guang)保存。
7.嚴格按(an)照說明書的操作(zuo)進行,試驗結果判(pan)定必須以酶(mei)標儀讀數(shu)為準.
8.所(suo)有樣品,洗滌液(ye)和(he)各(ge)種(zhong)廢(fei)棄物都應按傳(chuan)染物處理(li)。
小鼠檢測試劑盒操作步驟:
1.標準品的稀釋:本小鼠檢測(ce)試劑盒提供原(yuan)倍(bei)標(biao)準品一支,用戶可按照(zhao)下(xia)列圖表在小試管中(zhong)進行稀釋。
2.加(jia)樣(yang)(yang)(yang):分(fen)別設空(kong)白(bai)孔(kong)(空(kong)白(bai)對(dui)照孔(kong)不(bu)加(jia)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)及(ji)酶標(biao)試劑,其余各(ge)步操作相同)、標(biao)準(zhun)孔(kong)、待(dai)(dai)測樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)孔(kong)。在(zai)酶標(biao)包被板(ban)上(shang)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)準(zhun)確加(jia)樣(yang)(yang)(yang) 50µl,待(dai)(dai)測樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)孔(kong)中先加(jia)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)稀釋(shi)液 40µl,然后再加(jia)待(dai)(dai)測樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin) 10µl(樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)終稀釋(shi)度為(wei) 5 倍)。加(jia)樣(yang)(yang)(yang)將樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)加(jia)于(yu)酶標(biao)板(ban)孔(kong)底部,盡量(liang)不(bu)觸及(ji)孔(kong)壁,輕(qing)輕(qing)晃動混勻(yun)。
3.溫(wen)育(yu)(yu):用封板(ban)膜(mo)封板(ban)后置 37℃溫(wen)育(yu)(yu) 30 分(fen)鐘(zhong)。
4.配(pei)液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸(zheng)餾(liu)水 30 倍稀釋(shi)后(hou)備用
5.洗(xi)滌(di):小心揭掉封板(ban)膜(mo),棄去液體,甩干(gan),每孔加滿洗(xi)滌(di)液,靜(jing)置 30 秒后棄去,如此(ci)重復 5 次(ci),拍干(gan)。
6.加酶:每(mei)孔加入(ru)酶標試劑 50µl,空白孔除(chu)外。
7.溫育(yu):操(cao)作同(tong) 3。
8.洗滌(di):操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立(li)轉(zhuan)黃色)。
11.測定:以空白空調零,450nm 波長依序(xu)測量各孔(kong)的吸光度(OD 值)。 測定應(ying)在加終止液后 15 分鐘以內進行。