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酶(mei)ELISA試(shi)劑(ji)盒樣品(pin)收集(ji)方(fang)法
  • 發布日期:2021-04-22      瀏覽次數:787
    • 酶ELISA試劑盒樣本處理及要求:

      1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。
      仔細收集(ji)上(shang)清,保存(cun)過(guo)程中如出現(xian)沉(chen)淀,應再次離(li)心。

      2. 血漿:應根據(ju)標本的要求選擇(ze)EDTA或(huo)檸檬酸鈉作(zuo)為(wei)抗(kang)凝劑,混(hun)合10-20分(fen)鐘(zhong)(zhong)后,離心20分(fen)鐘(zhong)(zhong)左右(2000-3000轉(zhuan)/分(fen))。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再(zai)次離心。

      3. 尿液(ye):用(yong)無菌管收集,離心20分(fen)鐘左右(2000-3000轉/分(fen))。仔(zi)細收集上清,保存過程(cheng)中(zhong)如(ru)有沉淀形(xing)成,應(ying)再次(ci)離心。胸腹水、腦(nao)脊液(ye)參照實行(xing)。

      4. 細(xi)(xi)(xi)(xi)胞培養(yang)上(shang)清:檢(jian)測分泌(mi)性的(de)成(cheng)(cheng)份(fen)時(shi),用無菌(jun)管(guan)收集。離(li)(li)心(xin)20分鐘左(zuo)右(you)(2000-3000轉/分)。仔細(xi)(xi)(xi)(xi)收集上(shang)清。檢(jian)測細(xi)(xi)(xi)(xi)胞內的(de)成(cheng)(cheng)份(fen)時(shi),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xi)(xi)(xi)(xi)胞懸(xuan)液,細(xi)(xi)(xi)(xi)胞濃度(du)達到(dao)100萬/ml左(zuo)右(you)。通過反復(fu)凍融,以(yi)使細(xi)(xi)(xi)(xi)胞破壞(huai)并放(fang)出細(xi)(xi)(xi)(xi)胞內成(cheng)(cheng)份(fen)。離(li)(li)心(xin)20分鐘左(zuo)右(you)(2000-3000轉/分)。仔細(xi)(xi)(xi)(xi)收集上(shang)清。保存過程中如有沉(chen)淀形成(cheng)(cheng),應(ying)再次離(li)(li)心(xin)。

      5. 組織(zhi)標本(ben):切(qie)割標本(ben)后,稱取重量(liang)。加(jia)入(ru)一(yi)定(ding)量(liang)的PBS,PH7.4。用液(ye)氮迅速冷凍保存備用。標本(ben)融化后仍(reng)然保持2-8℃的溫度。加(jia)入(ru)一(yi)定(ding)量(liang)的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本(ben)勻漿充(chong)分(fen)。離(li)心20分(fen)鐘左右(2000-3000轉/分(fen))。仔細(xi)收集(ji)上清。分(fen)裝(zhuang)后一(yi)份待檢測(ce),其(qi)余冷凍備用。

      6. 標本(ben)采集后盡(jin)早進行提(ti)取(qu),提(ti)取(qu)按相關文獻進行,提(ti)取(qu)后應(ying)(ying)盡(jin)快進行實驗。若不能(neng)馬上(shang)進行試驗,可將標本(ben)放于-20℃保存,但應(ying)(ying)避(bi)免(mian)反復凍融(rong).

      7. 不能檢測含NaN3的(de)樣品(pin),因(yin)NaN3抑制辣根過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)酶的(de)(HRP)活性。

      酶ELISA試劑盒樣品收集:

      1. 血清:全血樣品(pin)于室溫放(fang)置2小時或4℃過(guo)夜后(hou)于1000×g離心20分鐘(zhong),取上清即可檢測,收集血液的試管應(ying)為一(yi)次(ci)性的無(wu)(wu)熱原,無(wu)(wu)內毒(du)素試管。

      2. 血(xue)(xue)漿:抗凝(ning)劑使用EDTA-Na2,樣品(pin)采集后30分鐘(zhong)內于1000×g離(li)心15分鐘(zhong),取上清即可檢測(ce)。避免使用溶血(xue)(xue),高(gao)血(xue)(xue)脂樣品(pin)。

      3. 組(zu)(zu)織勻(yun)漿(jiang):用預冷的(de)(de)(de)PBS (0.01M, pH=7.4)沖(chong)洗組(zu)(zu)織,去除殘留血液(勻(yun)漿(jiang)中(zhong)裂(lie)解(jie)的(de)(de)(de)紅(hong)細(xi)胞(bao)會(hui)影響測(ce)量(liang)結果(guo)),稱重后(hou)將(jiang)碎。將(jiang)剪碎的(de)(de)(de)組(zu)(zu)織與對應體(ti)積的(de)(de)(de)PBS(一般(ban)按(an)1:9的(de)(de)(de)重量(liang)體(ti)積比,比如(ru)1g的(de)(de)(de)組(zu)(zu)織樣(yang)品對應9mL的(de)(de)(de)PBS,具體(ti)體(ti)積可根據(ju)實驗(yan)需要適當調整,并做好(hao)記錄。在(zai)PBS中(zhong)加(jia)入蛋白酶抑制劑)加(jia)入玻璃勻(yun)漿(jiang)器中(zhong),于冰上充分(fen)(fen)研磨。為了(le)進一步裂(lie)解(jie)組(zu)(zu)織細(xi)胞(bao),可以對勻(yun)漿(jiang)液進行超聲破碎,或反復凍融(rong)。zui后(hou)將(jiang)勻(yun)漿(jiang)液于5000×g離心5~10分(fen)(fen)鐘,取上清檢測(ce)。

      4. 細胞培養上清:取細胞培養上清于1000×g離心20分鐘,除(chu)去(qu)雜(za)質及細胞碎片(pian)。取上清檢(jian)測(ce)。

      5. 其它生物樣(yang)品:1000×g離心20分鐘,取上(shang)清即可檢測

      6. 樣品應清澈透明(ming),懸浮物應離心(xin)去除。

      7. 樣(yang)品收集后(hou)若(ruo)在1周內進行檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)的可保(bao)存于(yu)4℃,若(ruo)不(bu)能及時檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce),請按一(yi)次使用(yong)量分(fen)裝,凍存于(yu)-20℃(1個月內檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)),或-80℃(6個月內檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)),避免(mian)反復凍融。

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