耐腸球菌PCR檢測試劑盒說明書組成及試劑配制:
1、 酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、耐腸球菌PCR檢測試劑盒說明書 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。

樣本采集(ji)、存放及(ji)運輸：
1、樣本采集：各類型樣本按照常規方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可保存，但應避免反復凍融（zui多凍融3次）；
3、運輸：采用泡沫箱加(jia)冰密封進(jin)行運輸。

特(te)點優(you)勢：
 耐腸球菌PCR檢測試劑盒說明書   1.特異性：所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過GenBank及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
    2.   重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現性為100%。
    3.   靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
    4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
    5.   優勢1：序(xu)列(lie)資(zi)源豐(feng)富，除GenBank公布(bu)的序(xu)列(lie)外，公司(si)還(huan)進(jin)行了大量(liang)菌株的序(xu)列(lie)破譯(yi)，從理論上保證(zheng)所選引(yin)物具有良好的保守(shou)性(xing)和特異性(xing)。

    6.   優勢2：該(gai)系列試(shi)劑盒均(jun)(jun)經(jing)過(guo)(guo)大量(liang)的(de)(de)保守性及(ji)(ji)特異性實驗驗證，憑借公司擁有(you)的(de)(de)豐富的(de)(de)菌(jun)(jun)(jun)種資源，每一種檢(jian)測試(shi)劑盒均(jun)(jun)經(jing)過(guo)(guo)了20余(yu)(yu)種標(biao)準菌(jun)(jun)(jun)株和(he)臨(lin)床菌(jun)(jun)(jun)株的(de)(de)保守性驗證及(ji)(ji)40余(yu)(yu)種近緣標(biao)準菌(jun)(jun)(jun)株和(he)臨(lin)床菌(jun)(jun)(jun)株的(de)(de)特異性驗證，確保在使用(yong)過(guo)(guo)程中不會出現任何的(de)(de)假陽性及(ji)(ji)假陰性報告結果。

反應五要素：
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數第二個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引(yin)物(wu)量：每條引(yin)物(wu)的(de)濃度0.1～1umol或10～100pmol，以(yi)低引(yin)物(wu)量產(chan)生所需要(yao)的(de)結果為好，引(yin)物(wu)濃度偏高會引(yin)起錯配(pei)和非特異性擴(kuo)增，且可增加引(yin)物(wu)之間形成二聚體(ti)的(de)機會。

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